微生物菌种保藏方法

　　1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、

　　培养后再保存，它是基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的

　　浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。　　一般地，大

　　多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。

　　传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物

　　质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期转种，工作量大；⑤杂菌的污染机会较多。

　　微生物菌种保藏箱参数：

　　【型    号】FYL-YS-1028L

　　【额定电压】AC220V

　　【额定频率】50Hz

　　【输入功率】360w

　　【额定电流】2.4A

　　【噪    音】50dB（A）00

　　【箱体尺寸】1267×680×2115 mm

　　【有效容积】1028L

　　【气候类型】N

　　【温度范围】2～48℃

　　【制冷剂用量】R134a（382g）

　　1、产品结构为立式箱体。主体分为三部分：电气控制系统，制冷系统、显示系统。

　　2、箱体内部采用密度聚氨酯整体发泡，具有重量轻、保温性能好等特点。

　　3、微电脑温度控制器，数码显示，具有低温报警、温感器故障报警和断电报警功能，防止出现意外。

　　4、温感探头，自动显示箱体内部温度、湿度，便于随时观察箱体内温湿度变化。

　　5、采用新型风道设计，钢快速风扇，厚壁快速导冷铜管，温度度。

　　6、制冷系统合理，采用强制空气循环，确保箱体内恒温无死角。降温速度快，设定的温度在短时间里，即可达到设置温度要求。

　　7、使用双层强度钢化玻璃，保温效果好，透明度，便于随时观察箱体内部存放的物品。

　　8、采用丹佛斯压缩机，运转平衡，噪音低，使用寿命长。

　　9、箱体采用的彩涂板，经喷涂工艺，表面色泽柔和，内部隔层可任意放宽和缩小，便于存放不同物品。

　　10、箱体内部具备照明设施，方便夜间观察储存的物品。

　　11、安全双门锁设计，实现双人双管，防止随意开启。

　　12、箱体底部选用超出普通万向轮承载量2倍的脚轮， 止动底脚方便使用。

　　产品配置清单

　　1、说明书1本

　　2、保修卡1张

　　3、合格1张

　　4、搁  架10个

　　5、钥  匙2把

　　2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种

　　方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥，并限制氧的供给而达到削弱微生物代谢的目的。其具有方

　　法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌

　　等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。

　　3、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种，如

　　①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。方法是在的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在

　　室温下密封保存。保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和。使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤（5克）

　　置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基（以含水量为土壤持水量的60%为宜），然后高压。再将需保存的微生物进行大量台式，培养

　　至菌丝能用肉眼确认的程度为止，移入干燥器中经短时间干燥或风干后密封，冷藏或室温保存。　　②砂土保存法：取清洁的砂，筛去掉大砂

　　粒，并用磁铁吸去砂中铁屑，再用NaOH溶液、10%HCl溶液和水交替清洗数次，干燥后，置于试管或安瓶管中保持2～m深，再经干热后，加入

　　1ml菌种培养液，经充分混匀后，放入真空干燥器中，完全干燥后熔封保存。也可用二份洗净的砂（经HCl预处理）和一份贫瘠、过筛的黄土搀和后，再进

　　行菌种保藏。　　③硅胶保存法：以6～16目的无色硅胶代替砂子，干热后，加入菌液。加菌液时，由于硅胶的吸附热常使温度升高，因而需设法加以冷却。

　　④磁珠保存法：将菌液浸入素烧磁珠（或多孔玻璃珠）后再进行干燥保存的一种方法。在螺旋口试管中装入1/2管高的硅胶（或无水CaSO4），上铺玻璃

　　棉，再放上10～20粒磁珠，经干热后，接入菌悬液，后冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。本法对酵母菌很有效，特别适用于根瘤菌，可保存长达两

　　年半时间。　　⑤麸皮保存法：在麸皮内加入60%的水，经后台式培养，后干燥保藏。　　⑥纸片（滤纸）保存法：将纸片浸入培养液或菌悬液中，常压或减压干燥后，置于装有干燥剂的容器内进行保存。

　　4、悬液保存法：即使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法。常用的有，　　①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。　　②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

　　5、寄主保存法：即令微生物侵入其寄主后加以保存的方法。

　　6、冷冻保存法：适用于抗冻力强的微生物。这些微生物可在其菌体外遭受冻结的情况下而不受损伤，而对其它大多数微生物而言，无论在外冻结还是在内冻结，都会对菌体造成损伤，因此当采用这种保藏方法时，应注意以下几点，　　①要选择适于冷冻干燥的菌龄；　　②要选择适宜的培养基，因为某些微生物对冷冻的抵抗力，常随培养基成分的变化而显示出巨大差异；　　③要选择合适的菌液浓度，通常菌液浓度越高，生存率越高，保存期也越长；　　④在菌液内不添加电解质（如食盐等）；　　⑤可在菌液内添加甘油等保护剂，以防止在冷冻过程中出现菌体大量死亡的现象。同样，也可添加各种糖类、去纤维和脱脂牛乳等具有良好保护效果的溶剂，但对有些微生物而言，不加保护剂时更有效。　　⑥原则上应尽快进行冷冻处理，但当加入保护剂时，可静置一段时间后再进行处理。　　⑦就动物而言，应在-20℃范围内以1℃/min左右的速度缓慢降温，此后必须尽快降到贮藏温度；而对绝大多数微生物而言，则不必如此，如结构较为复杂的原虫则可在-35℃范围内进行缓慢降温，而噬菌体则必需采用上述的二阶段法进行冷冻；　　⑧若进行保存，则贮藏温度越低越好；　　⑨取用冷冻保存的菌种时，应采取速融措施，即在35～40℃温水中轻轻振荡使之迅速融解。而就厌氧菌来说，则应选择静置融化的措施。当冷冻菌融化后，应尽量避免再次冷冻，否则菌体的存活率将显著下降。　　常用的冷冻保存法包括：

　　①低温冰箱保存法（-20℃、-50℃或-85℃）：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，

　　有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。　　②干冰保存法（-70℃左右）：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。　　③液氮保存法（-196℃）：是适用范围广的微生物保存法。其操作步骤如下，　　a、装安瓶管：使用尽量浓厚的菌体悬浮于含有适当防冻剂（保存霉菌不用防冻剂）的溶液中，将0.2～1ml的这种溶液分装于安瓶中，或在装有分散剂的安瓶中直接台式，或将菌丝体琼脂块直接悬浮于分散剂中。　　b、熔封安瓶管：若直接贮存于气相液氮中（-150℃～-170℃）时，则不需熔封。　　c、检查安瓶管是否熔封良好：即在4℃下，将熔封安瓶管在适当的色素溶液中浸泡2～30分钟后，观察有无色素进入安瓶。　　d、缓慢冷却：将熔封安瓶管置于小罐中，然后用液氮气以约1℃/min的速度冷却至-25℃左右，也可在-20℃～-25℃的冰箱内缓慢冷却30～60min。　　e、速冷：后浸入液氮中快速冷却至-196℃。

　　7、冷冻干燥保存法：其原理是先将微生物冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分。事实上，从菌体中除去大部分水分后，的生理活动就会停止，因此

　　可以达到维持生命状态的目的。该方法适用于绝大多数微生物菌种（包括噬菌体和立克次氏体等）的保存。在进行冷冻干燥时，需注意以下几个问题：

　　a、冷冻干燥前的培养条件：先检验菌种纯度。一般地说，将待保存的微生物在营养丰富且容易增菌的培养基上进行培养为宜；菌龄以达到对数生为好；若

　　为有芽孢或孢子的微生物，则以芽孢和孢子形成以后进行保存为好；菌液浓度以高为好，如细菌应达到109～1010/ml。　　b、菌株号码等的标记：可在安瓶外侧标记或在安瓶内封入标签。　　c、安瓶的准备：将安瓶在2%HCl中浸泡过夜，自来水冲洗3次后，蒸馏水刷净，干燥，塞棉塞，贴标签，干热或温热后，60℃恒温干燥。　　d、添加保护剂：常用的保护剂有脱脂乳、12%蔗糖、加7.5%葡萄糖的普通肉汤以及加7.5%葡萄糖的等等。

　　8、甘油管保藏法：在5ml菌种保藏管中，将等体积的菌悬液和40%的甘油充分混匀后，于-20℃冰箱中保存。